By this author

Improving the efficiency and safety of human <i>CCR5</i> gene editing by selection of optimal guide RNAs for SpCAS9 and CAS12A

Issue number 2 from 19.03.2026

Достижения в области редактирования генома с помощью системы CRISPR/Cas открыли новые возможности для лечения многих заболеваний человека, включая ВИЧ-инфекцию. Нокаут гена CCR5, как потенциальный способ лечения ВИЧ-инфекции, изучается уже давно. Проанализированы ранее изученные направляющие (гидовые) РНК нуклеаз SpCas9 и AsCas12a, нацеленные на ген CCR5, и отобраны наиболее эффективные из них. С использованием биоинформатических подходов проведен поиск новых гидовых РНК этих же нуклеаз. Сравнили эффективность расщепления целевых сайтов нуклеазами SpCas9, SpCas9-HF1-plus и AsCas12a в комплексе с выбранными гидовыми РНК, а также их нецелевую активность. Показано, что две из протестированных гидовых РНК для SpCas9-HF1-plus и три для AsCas12a обеспечили разрезание гена CCR5 в 60–72% клеток, при этом их нецелевая активность находилось ниже предела детекции. Таким образом, эти гидовые РНК можно рассматривать в качестве кандидатов для разработки подходов генной терапии ВИЧ-инфекции.

12 0

Influence of homology arm length and structure on the efficiency of long transgene integration into a cleavage site induced by SpCas9 or AsCpf1

Issue number 2 from 19.03.2026

Одним из многообещающих новых подходов к лечению ВИЧ-инфекции является CRISPR/Cas-опосредованный нокаут гена рецептора CCR5 с последующей интеграцией антиВИЧ-гена в область разрыва. Нокауту гена CCR5 посвящено множество работ, однако эффективность последующей таргетной интеграции протяженных фрагментов остается недостаточно изученной. Чтобы оценить эффективность этого подхода, мы изучили встраивание кассеты, экспрессирующей ген EGFP, в локус CCR5 с использованием двух разных нуклеаз (SpCas9 и AsCpf1) и различных вариантов донорной ДНК, доставляемой в составе рекомбинантных аденоассоциированных вирусных векторов (rAAV). Для каждой из нуклеаз были сконструированы пять вариантов донорной ДНК, отличающихся длиной плеч гомологии (от 150 до 1000 п.н.) или их структурой. Эффективность интеграции трансгена с плечами гомологии 150 п.н. оказалась самой низкой при использовании обеих нуклеаз и достоверно отличалась от конструкций с более длинными плечами гомологии. Также показано, что наличие в донорной ДНК сайтов разрезания нуклеазы, фланкирующих кассету с плечами гомологии, не влияет на эффективность интеграции трансгена при AAV-доставке. Максимальная эффективность встраивания (59 ± 6%) достигнута при использовании нуклеазы AsCpf1 и экспрессионной кассеты с плечами гомологии длиной 600 п.н.

5 0