Статьи автора

Повышение эффективности и безопасности редактирования гена <I>CCR5</I> человека путем выбора оптимальных направляющих РНК нуклеаз SpCas9 и AsCas12A

Номер выпуска 2 от 19.03.2026

Достижения в области редактирования генома с помощью системы CRISPR/Cas открыли новые возможности для лечения многих заболеваний человека, включая ВИЧ-инфекцию. Нокаут гена CCR5, как потенциальный способ лечения ВИЧ-инфекции, изучается уже давно. Проанализированы ранее изученные направляющие (гидовые) РНК нуклеаз SpCas9 и AsCas12a, нацеленные на ген CCR5, и отобраны наиболее эффективные из них. С использованием биоинформатических подходов проведен поиск новых гидовых РНК этих же нуклеаз. Сравнили эффективность расщепления целевых сайтов нуклеазами SpCas9, SpCas9-HF1-plus и AsCas12a в комплексе с выбранными гидовыми РНК, а также их нецелевую активность. Показано, что две из протестированных гидовых РНК для SpCas9-HF1-plus и три для AsCas12a обеспечили разрезание гена CCR5 в 60–72% клеток, при этом их нецелевая активность находилось ниже предела детекции. Таким образом, эти гидовые РНК можно рассматривать в качестве кандидатов для разработки подходов генной терапии ВИЧ-инфекции.

10 0

Динамика экспрессии трансгена в осповакцинном векторе MVA под контролем промоторов p11, p13.5, pLEO160, p7.5 и mH5, независимость уровня экспрессии трансгена от локуса встраивания

Номер выпуска 2 от 19.03.2026

Модифицированный вирус осповакцины Анкара (MVA), обладающий высокой иммуногенностью и доказанной безопасностью, считается перспективным в качестве вектора для разработки вакцин. Неоспоримым достоинством MVA-вектора является его большая емкость и возможность встраивания нескольких трансгенов в разные локусы вирусного генома, что позволяет создавать мультивалентные вакцины, кодирующие несколько антигенов одновременно. В настоящей работе изучена экспрессия трансгена, кодирующего эпитопы белков вируса гриппа, после его интеграции в пять локусов генома MVA. Показана независимость уровня экспрессии трансгена от локуса встраивания. Также определена динамика экспрессии репортерного гена, кодирующего усиленный зеленый флуоресцентный белок (Enhanced Green Fluorescent Protein, EGFP), под контролем осповакцинных промоторов p11, p13.5, pLEO160, p7.5 и mH5 при встраивании экспрессионной кассеты в локус гена F13L MVA. Максимальный уровень экспрессии, но с более поздним началом синтеза белка, обеспечивал поздний промотор р11. Использование промотора р13.5 приводило к более раннему синтезу белка EGFP в клетке и более высокому уровню экспрессии гена, чем при использовании промоторов pLEO160, p7.5 и mH5, которые обеспечивали одинаковый уровень и динамику экспрессии репортерного гена. Полученные данные могут быть полезны для создания векторных MVA-вакцин, содержащих несколько антигенов.

4 0

Влияние длины и структуры плеч гомологии на эффективность интеграции длинного трансгена в область разрыва, создаваемого нуклеазами SpCas9 или AsCpf1

Номер выпуска 2 от 19.03.2026

Одним из многообещающих новых подходов к лечению ВИЧ-инфекции является CRISPR/Cas-опосредованный нокаут гена рецептора CCR5 с последующей интеграцией антиВИЧ-гена в область разрыва. Нокауту гена CCR5 посвящено множество работ, однако эффективность последующей таргетной интеграции протяженных фрагментов остается недостаточно изученной. Чтобы оценить эффективность этого подхода, мы изучили встраивание кассеты, экспрессирующей ген EGFP, в локус CCR5 с использованием двух разных нуклеаз (SpCas9 и AsCpf1) и различных вариантов донорной ДНК, доставляемой в составе рекомбинантных аденоассоциированных вирусных векторов (rAAV). Для каждой из нуклеаз были сконструированы пять вариантов донорной ДНК, отличающихся длиной плеч гомологии (от 150 до 1000 п.н.) или их структурой. Эффективность интеграции трансгена с плечами гомологии 150 п.н. оказалась самой низкой при использовании обеих нуклеаз и достоверно отличалась от конструкций с более длинными плечами гомологии. Также показано, что наличие в донорной ДНК сайтов разрезания нуклеазы, фланкирующих кассету с плечами гомологии, не влияет на эффективность интеграции трансгена при AAV-доставке. Максимальная эффективность встраивания (59 ± 6%) достигнута при использовании нуклеазы AsCpf1 и экспрессионной кассеты с плечами гомологии длиной 600 п.н.

3 0