GTPаза Era золотистого стафилококка (Staphylococcus aureus) является одним из факторов созревания рибосомы. Era участвует в поздних этапах сборки малой (30S) субъединицы рибосомы и регулирует образование целой 70S рибосомы. Исследование структуры комплекса Era и 30S субъединицы S. aureus поможет в понимании процессов созревания рибосомы и механизмов регуляции синтеза белка у этого патогенного микроорганизма. В данной работе представлены протоколы получения GTPазы Era и незрелых 30S субъединиц рибосом из S. aureus, протокол сборки их комплекса для дальнейших структурных исследований методом криоэлектронной микроскопии, а также проведен предварительный сбор данных с обработкой микрографий.
Правильная сборка и созревание рибосомных субъединиц – важнейшие процессы, обеспечивающие функциональную активность рибосом, эффективность и точность трансляции. Одним из белковых факторов, участвующих в процессах созревания большой субъединицы рибосомы, является GTP-связывающий белок YsxC, обнаруженный у многих бактерий. Известно, что в отсутствие YsxC в клетке накапливаются незрелые рибосомные интермедиаты, известные как 45S субъединицы, которые не способны взаимодействовать с малой субъединицей и формировать функционально активные рибосомы, а делеция гена ysxC летальна для Staphylococcus aureus. Механизм взаимодействия YsxC с рибосомой S. aureus остается неизученным. В данной работе разработан протокол выделения, очистки и сборки комплекса белка YsxC с 50S субъединицей рибосомы S. aureus, с использованием которого получен образец для регистрации данных просвечивающей криоэлектронной микроскопии.
Индексирование
Scopus
Crossref
Высшая аттестационная комиссия
При Министерстве образования и науки Российской Федерации