By this author

Optimization of Production of Recombinant Adeno-Associated Virus Serotype 9

Issue number 4 from 31.01.2026

Векторы на основе аденоассоциированных вирусов (ААV) зарекомендовали себя как удобный инструмент геномного редактирования. Однако для трансгенеза лабораторных животных или генной терапии заболеваний человека требуется высокий титр ААV, в получении которого заключается основная трудность. Мы провели оптимизацию условий получения ААV серотипа 9 (ААV9) с целью повышения выхода вируса. Широко распространенный подход подразумевает трансфекцию клеток-продуцентов тремя плазмидами. Мы провели трансфекцию двумя плазмидами, кодирующими все необходимые компоненты для продукции ААV9. Это позволило повысить итоговый титр в четыре раза. Оптимизация по молярному соотношению плазмиды, содержащей ген интереса, и плазмиды, кодирующей белки репликативного комплекса, капсида и вспомогательных факторов, привела к двукратному повышению титра. Оптимизация состава производственной среды для продукции ААV9 позволила существенно повысить выход вируса. При замене производственной среды DMEM-F12 на менее питательную – DMEM – с добавкой эмбриональной сыворотки крупного рогатого скота выход ААV9 увеличился почти на 3 порядка. Таким образом, оптимизация числа и соотношения плазмид, а также состава производственной среды позволили многократно повысить продукцию ААV9 и достичь итогового титра в 2.5 × 10 векторных геномов в 1 мл культуральной среды адгезивных клеток линии HEK293T.

70 0