- Код статьи
- S30345553S0026898425040113-1
- DOI
- 10.7868/S3034555325040113
- Тип публикации
- Статья
- Статус публикации
- Опубликовано
- Авторы
- Том/ Выпуск
- Том 59 / Номер выпуска 4
- Страницы
- 655-662
- Аннотация
- Векторы на основе аденоассоциированных вирусов (ААV) зарекомендовали себя как удобный инструмент геномного редактирования. Однако для трансгенеза лабораторных животных или генной терапии заболеваний человека требуется высокий титр ААV, в получении которого заключается основная трудность. Мы провели оптимизацию условий получения ААV серотипа 9 (ААV9) с целью повышения выхода вируса. Широко распространенный подход подразумевает трансфекцию клеток-продуцентов тремя плазмидами. Мы провели трансфекцию двумя плазмидами, кодирующими все необходимые компоненты для продукции ААV9. Это позволило повысить итоговый титр в четыре раза. Оптимизация по молярному соотношению плазмиды, содержащей ген интереса, и плазмиды, кодирующей белки репликативного комплекса, капсида и вспомогательных факторов, привела к двукратному повышению титра. Оптимизация состава производственной среды для продукции ААV9 позволила существенно повысить выход вируса. При замене производственной среды DMEM-F12 на менее питательную – DMEM – с добавкой эмбриональной сыворотки крупного рогатого скота выход ААV9 увеличился почти на 3 порядка. Таким образом, оптимизация числа и соотношения плазмид, а также состава производственной среды позволили многократно повысить продукцию ААV9 и достичь итогового титра в 2.5 × 10 векторных геномов в 1 мл культуральной среды адгезивных клеток линии HEK293T.
- Ключевые слова
- аденоассоциированный вирус трансфекция клетки HEK293T трансгенез генная терапия
- Дата публикации
- 31.01.2026
- Год выхода
- 2026
- Всего подписок
- 0
- Всего просмотров
- 64
Библиография
- 1. Issa S.S., Shaimardanova A.A., Solovyeva V.V., Rizvanov A.A. (2023) Various AAV serotypes and their applications in gene therapy: an overview. Cells. 12, 785.
- 2. Wang D., Tai P.W.L., Gao G. (2019) Adeno-associated virus vector as a platform for gene therapy delivery. Nat. Rev. Drug Discov. 18, 358–378.
- 3. McCarty D.M. (2008) Self-complementary AAV vectors; advances and applications. Mol. Ther. 16, 1648–1656.
- 4. Lunev E., Karan A., Egorova T., Bardina M. (2022) Adeno-associated viruses for modeling neurological diseases in animals: achievements and prospects. Biomedicines. 10, 1140.
- 5. Li C., Samulski R.J. (2020) Engineering adeno-associated virus vectors for gene therapy. Nat. Rev. Genet. 21, 255–272.
- 6. Brommel C.M., Cooney A.L., Sinn P.L. (2020) Adeno-associated virus-based gene therapy for lifelong correction of genetic disease. Hum. Gene Ther. 31, 985–995.
- 7. Pupo A., Fernández A., Low S.H., François A., Suárez-Amarán L., Samulski R.J. (2022) AAV vectors: the Rubik’s cube of human gene therapy. Mol. Ther. 30, 3515–3541.
- 8. Wang J.H., Gessler D., Zhan W., Gallagher L., Gao G. (2024) Adeno-associated virus as a delivery vector for gene therapy of human diseases. Signal. Transduct. Target Ther. 9, 78.
- 9. Ayuso E, Mingozzi F, Bosch F. (2010) Production, purification and characterization of adeno-associated vectors. Curr. Gene Ther. 10, 423–436.
- 10. Guan J.S., Chen K., Si Y., Kim T., Zhou Z., Kim S., Zhou L., Liu X.M. (2022) Process improvement of adeno-associated virus (AAV) production. Front. Chem. Eng. 4, 830421.
- 11. Kimura T., Ferran B., Tsukahara Y., Shang Q., Desai S., Fedoce A., Pimentel D.R., Luptak I., Adachi T., Ido Y., Matsui R., Bachschmid M.M. (2019) Production of adeno-associated virus vectors for in vitro and in vivo applications. Sci. Rep. 9, 13601.
- 12. Воробьев П.О., Кочетков Д.В., Василенко К.В., Липатова А.В. (2022) Сравнительный анализ эффективности общедоступных методов трансфекции модельных клеточных линий для задач биотехнологии. Вестник РГМУ. 3, 11–19. https://doi.org/10.24075/vrgmu.2022.031
- 13. Zhao H., Lee K.J., Daris M., Lin Y., Wolfe T., Sheng J., Plewa C., Wang S., Meisen W.H. (2020) Creation of a high-yield AAV vector production platform in suspension cells using a design-of-experiment approach. Mol. Ther. Methods Clin. Dev. 18, 312–320.
- 14. Aurnhammer C., Haase M., Muether N., Hausl M., Rauschhuber C., Huber I., Nitschko H., Busch U., Sing A., Ehrhardt A., Baiker A. (2012) Universal real-time PCR for the detection and quantification of adeno-associated virus serotype 2-derived inverted terminal repeat sequences. Hum. Gene Ther. Methods. 23, 18–28.
- 15. Bennett A., Mietzsch M., Agbandje-McKenna M. (2017) Understanding capsid assembly and genome packaging for adeno-associated viruses. Future Virol. 12, 283–297.
- 16. Guan J.S., Chen K., Si Y., Kim T., Zhou Z., Kim S., Zhou L., Liu X.M. (2022) Process improvement of adeno-associated virus (AAV) production. Front. Chem. Eng. 4, 830421.
- 17. Ohba K., Mizukami H. (2023) Protocol for producing an adeno-associated virus vector by controlling capsid expression timing. STAR Protoc. 4, 102542.
- 18. Yang J., Zhou W., Zhang Y., Zidon T., Ritchie T., Engelhardt J.F. (1999) Concatamerization of adenoassociated virus circular genomes occurs through intermolecular recombination. J. Virol. 73, 9468–9477.
- 19. Grieger J.C., Soltys S.M., Samulski R.J. (2016) Production of recombinant adeno-associated virus vectors using suspension HEK293 cells and continuous harvest of vector from the culture media for GMP FIX and FLT1 clinical vector. Mol. Ther. 24, 287–297.
- 20. Chaudhry M.A., Vitalis T.Z., Bowen B.D., Piret J.M. (2008) Basal medium composition and serum or serum replacement concentration influences on the maintenance of murine embryonic stem cells. Cytotechnology. 58, 173–179.
